一、仪器概述：
赛多利斯流式细胞分析仪是专为高通量筛选而设计的流式细胞术平台，集仪器、软件和试剂于一体。采用“气隙间隔”采样方法，能够在短短5分钟内完成96孔板处理和分析，20分钟内完成384孔板处理和分析。具备多达27个检测通道（25种颜色选项），支持四激光配置（405nm、488nm、561nm、637nm等组合），检测范围覆盖细胞、微球、酵母细胞等低至0.2µm的颗粒。最小样本量低至4微升，可灵活兼容96孔板和384孔板。仪器尺寸为66cm×130cm×63cm。iQue®系列支持48小时连续运行，无需人工干预。其直观的iQue®Forecyt®软件简化了各级用户的操作流程，具有自动化、综合分析和高级可视化工具。
二、实验室环境与安装要求
作为精密仪器，对安装环境有严格要求。首先，仪器需要稳定的电压和洁净的气源，建议单独配备稳压电源和空气过滤器，避免电压波动或杂质影响采样精度。其次，实验室需保持20-25℃的恒温环境，湿度控制在40-60%，远离强磁场和粉尘，防止影响检测通道的灵敏度。仪器应安置在平稳的台面上，避免震动。iQue®Qmax推车设计非常实用，能在长时间运行期间便捷管理鞘液和废液，建议规划靠近废液处理区的位置以方便日常维护。此外，需确保以太网线缆已将iQue®连接到正确的计算机或网络端口。
三、开机操作流程
赛多利斯流式细胞分析仪的开机操作需要遵循规范流程：
第一步：外部检查。开机前务必检查鞘液桶和废液桶，确认鞘液充足、废液桶未满。检查鞘液过滤器是否有气泡，如有需执行排气泡操作。确认进样针和导管正确安装在蠕动泵上，没有被蠕动泵夹夹住。
第二步：电源开启。打开稳压电源，稳定数分钟后再开启仪器主电源。如果带液流车，需注意打开液流车电源开关。使用仪器背面邻近电源线处的开关打开仪器。
第三步：软件启动。启动计算机并打开iQue®Forecyt®软件。软件启动后系统将自动进入初始化程序，包括液路灌注和系统自检。
第四步：质量控制。使用iQue®QCBeads执行每日质量控制，覆盖所有通道。QCBeads是一种混合物微球，可在多种波长和强度下发出荧光，覆盖所有检测通道。
第五步：系统预热。仪器需要一定时间使激光器和液流系统达到稳定状态，建议预热至系统提示“Ready”后再开始实验。假期归来长期未用的仪器，建议提前24小时开机预热。
四、实验操作与数据采集
样本制备。将细胞接种到V形底96孔板或384孔板中，按照试剂盒说明标记样品，孵育并清洗孔板。样本在上机前需进行过滤处理，避免沉淀物堵塞喷嘴。细胞必须制成单细胞悬浮状态，不能聚集，也不允许有大量细胞碎片存在。iQue®系统的板载振荡功能可在取样前确保样本适当重悬，有助于改善QC结果及一致性。
实验设置。在Forecyt®软件的Design选项卡中设置实验参数，包括添加孔板、指定孔内容物和分析参数等。在Protocol选项卡中设置采集参数，如进样时间（SipTime）、样品顺序、振荡和清洁等。
数据采集。样本以“气隙间隔”流传送至检测器——即“样本—气隙—样本”的采样技术，可以一次处理整个孔板的数据。自动堵塞检测功能可在必要时提醒用户并暂停实验。指示灯提供可视化确认，确保一切运行顺畅。
五、日常维护（每日/每周/每月）
赛多利斯流式细胞分析仪的日常维护是延长仪器寿命和保证数据质量的关键。
每日维护：实验结束后，启动自动清洗程序冲洗进样针和管路，清除残留的细胞或微球碎片。检查鞘液和废液余量，及时补充或更换，避免影响下一次实验。检查玻璃瓶液位并确认浮子在正常工作，浮子误报液位可能导致液位读数错误。
每周维护：用无尘布擦拭机身和孔板托盘，用压缩空气清洁检测通道插槽。备份实验数据，避免数据丢失。运行一次快速校准程序，确保通道精度稳定。每周进行一次深度冲洗液路，可用10%次氯酸钠溶液冲洗5分钟，再用去离子水冲洗15分钟。
每月维护：更换进样针和管路耗材，检查气隙间隔采样系统的密封性。深度清洁废液管路，防止堵塞。更新Forecyt®软件至最新版本，修复已知漏洞。流路维护建议每176小时执行一次。iQue®BottleFiltersSet也建议在176小时运行时间后更换。
六、耗材管理与更换周期
正常运行依赖于规范的耗材管理。
进样针和导管：建议使用20小时后更换，以防止老化和堵塞。
鞘液与鞘液添加剂：iQue®鞘液添加剂浓缩液是日常启动的耗材，用于使管路和流通池中的样本流动顺畅。将一瓶鞘液添加剂浓缩液加入到1升水中即可配置成工作液。
QC微球：用于每日质量控制，建议制备后储存时长不超过5天，且储存在2-8℃下。正确的制备方法是将2滴微球加入盛装在1.5mL微量离心管中的300μL缓冲溶液（含1%PBS和0.1%BSA）中，临采样前在涡旋振荡器中混匀。
瓶式过滤器：iQue®BottleFiltersSet在176小时运行时间后需要更换。
维护试剂盒：iQue®FluidicsMaintenanceKit提供全面的流路维护耗材，支持自动化监测流控系统以确保最佳性能。
七、常见故障与排除
轻微堵孔预警。这是最常见的故障类型。堵塞检测功能会实时弹出警报，提示进样针有残留。按照软件给出的响应方案，启动自动清洗程序，5分钟内即可解决问题。如自上次流路维护以来的运行时间已接近或超过176小时，需再次执行流路维护。也可更换进样针和导管，然后清洁进样针和导管。
检测通道信号波动。如样本制备和耗材更换均无异常，需检查通道电压设置。可能是某一通道电压偏移导致，重新校准后信号可恢复稳定。
高背景噪音。仪器中有碎屑时可能会产生较高的背景噪音，执行流式细胞仪快速清洁程序并除气泡可解决此问题。
QC低事件计数。微球计数失败常见原因包括：微球制备和储存方式不当、进样针和导管老化、流路维护不及时。
Err394错误。表示设备在启动时未识别到外接存储模块。可先断电稍作等待后重新开机，排除临时识别异常；检查内部接线是否牢固。
仪器无法进入Ready状态。可能原因包括管路漏气、鞘液罐接口漏气、密封圈破损老化等，应遵循由简到难的顺序逐一排查。
如上述方法无法解决问题，可联系赛多利斯技术支持团队。必要时对仪器执行电源重启——先关闭Forecyt®中检测器的电源，然后使用仪器背面开关关闭仪器，此操作将使仪器进入较长时间的开机清洁程序。
八、iQue®Forecyt®软件使用指南
iQue®Forecyt®软件是赛多利斯流式细胞分析仪的核心控制与分析平台。
新建实验：从File下拉菜单选择NewExperiment，或点击图标打开新建实验窗口。为实验命名并选择保存位置。
实验设计：Design选项卡是设置实验参数的主要界面，包括添加孔板、指定孔内容物、分析参数等。可定义样品类型、位置以及稀释系列、细胞类型等额外注释层。
采集协议：Protocol选项卡用于设置采集参数，如进样时间、样品顺序、振荡和清洁。
数据分析：Forecyt®软件具有自动化、综合分析和高级可视化工具。用户可快速优化检测、调整设门并实时查看更新的全孔板分析。软件支持标准集群筛选工具，集成了孔板级注释、分析和可视化功能。
软件更新：如需升级到最新版本的iQue®Forecyt®软件，可发送电子邮件至赛多利斯技术支持团队。
九、样品制备与实验注意事项
样品制备质量直接影响流式细胞分析结果的准确性和可靠性。
单细胞悬液制备。流式细胞仪测定的是每个颗粒通过光路时的信号，因此细胞必须制成单细胞悬浮状态，不能聚集，也不允许有大量细胞碎片存在。从组织样本中分离细胞时需注意操作温和。
染色与孵育。按照试剂盒说明标记样品，注意避光孵育。荧光染色后需充分清洗以去除未结合的抗体。
上样前准备。所有溶液都要进行过滤处理，样本在上机前也要过滤，以免时间久了出现沉淀物而堵塞喷嘴。取样前的板载振荡功能可确保样本适当重悬。
实验记录。建议建立仪器使用台账，详细记录检测样本、耗材消耗和堵孔情况，既方便追溯实验数据，也能及时发现仪器潜在问题。
十、生物安全与操作规范
赛多利斯流式细胞分析仪的使用涉及生物样本，需严格遵守生物安全规范。
个人防护。操作人员必须穿戴实验服、护目镜和手套等个人防护装备。
样本处理。所有生物样本应按相应生物安全等级（BSL）要求处理和运输。未固定的生物样本运行时需特别注意气溶胶防护。
废液处理。废液桶中应加入适量消毒剂（如漂白水原液）进行无害化处理。废液需按照实验室生物废弃物处理规范处置。
仪器消毒。定期用适当的消毒剂对仪器表面和管路进行消毒。常用消毒溶液包括1%次氯酸钠或70-80%乙醇。使用10%漂白剂溶液进行系统清洗也是常见做法。
十一、性能优化与校准
为保证数据质量，定期校准和性能验证。
每日QC。使用iQue®QCBeads执行每日质量控制，运行DailyQC测试。QC测试可验证所有通道的性能是否在规格范围内。
快速校准。建议每周进行一次快速校准程序，确保通道精度稳定。定期校准通道参数的重要性不容忽视，可避免因电压偏移导致的信号波动。
验证微球。用2滴验证微球和300µLQsol缓冲液制备一瓶新的验证微球。按规格制备新的微球，确保QC结果可靠。
设门优化。确认已经为细胞群适当设门，以产生准确的测量结果。
十二、仪器长期停用与重启注意事项
假期归来或长期未用的仪器需要额外呵护。
停用前处理。如需将仪器移动或存放超过一个月，必须使用PurgeFluidics功能从管路中排出所有液体。
重启前准备。提前24小时开机预热，检查温度和湿度是否符合要求。用标准微球测试检测精度，若出现偏差及时校准。
重启后处理。运行完整的清洗和校准流程，确保样本进样均匀。管路残留干涸样本可能导致检测精度下降，深度清洗后可恢复正常。
十三、实验室管理与培训制度
良好的实验室管理制度是仪器高效运行的保障。
专人负责。仪器应由专人负责日常登记和基础维护。其他成员需通过线上预约使用，预约时需备注孔板类型和实验类型。
操作培训。建议组织内部实操培训，考核合格者方可独立使用仪器。对规范操作、高效完成实验且无耗材浪费的成员给予奖励，可调动团队积极性。
使用台账。建立仪器使用台账，详细记录检测样本、耗材消耗和堵孔情况，既方便追溯实验数据，也能及时发现仪器潜在问题。
产品介绍
